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华美·科赛格拍了拍你,速来围观蛋白酶K(Proteinase K)

浏览次数:438      日期:2020-07-03 11:22:00

蛋白酶K(Proteinase K),来源于林伯氏白色念球菌,属于丝氨酸蛋白酶类。蛋白酶K具有极高的酶活性和广泛的底物特异性,能优先分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸C末端邻接的酯键和肽键。在pH4.0到pH12.0均有活性,最适pH在7.5-8.0之间,最适温度在50-55℃之间。在0.2-1%SDS或者10mM尿素存在下,蛋白酶K显示出更高的活力,而在常用浓度的EDTA,Triton X-100,盐酸胍存在下均对蛋白酶K活力影响不大。


蛋白酶K的应用


在新冠等生物检测中的应用

对于新冠病毒,核酸扩增试验时的处理、抽提、扩增为高风险,因此扩增前需要对标本先行灭活病毒,蛋白酶K(Proteinase K)是病毒采样液的重要组分,可裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解。并且可以灭活病毒,让病毒的蛋白变性,失去活性而“死掉”,不再有传染性,提高运输和检测阶段的安全性。


在DNA、RNA提取过程中的应用

蛋白酶K能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离,在提取高分子量核酸时有很大的优势。蛋白酶K还常被用于RNA提取过程中RNase的抑制和降解。RNA的质量对于Northem印迹及杂交分析、cDNA合成及体外翻译等实验的成败至关重要。而RNA极不稳定、易于被广泛存在的RNase降解,因此利用蛋白酶创造一个无RNase的环境、严格防止RNase污染是成功提取RNA的关键。


在原位杂交中的应用

蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前标本的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以利于检测探针的穿透,提高检测的敏感性。


在灭活生活和工业用水中细菌的应用

病毒外层结构一般以衣壳蛋白为主,蛋白酶K可以对病毒衣壳蛋白进行破坏,从而干扰病毒与宿主细胞的结合。在一定条件下,67.51ug/mL浓度的蛋白酶K处理lh对纯水和生活污水中病毒灭活率分别达到了99.4%和49.4%,处理3h的灭活率分别是>99.9%和81.8%,灭活病毒的效果明显。用蛋白酶K进行病毒灭活的优点是消毒剂本身无害,而且不产生有害消毒产物,所以这是一种高效环保的方法。


在肉类嫩化中的应用

蛋白酶K能分解肉的肌纤维,结缔组织的蛋白质,甚至包括弹性蛋白及胶原蛋白,使蛋白质的各级空间结构发生变化,部分肽键断裂,肉料吸水膨胀,质地变嫩,满足消费者对肉类品质的要求。


华美·科赛格蛋白酶K


华美·科赛格最新推出一批高质量的蛋白酶K(Proteinase K),利用本公司生化检测平台对自产蛋白酶K进行表征,显示其纯度高,比酶活高。该产品应用于新冠核酸提取试剂盒 ,能完全消化各种核酸酶和其他蛋白质,防止病毒核酸降解,优化提取效率 ,液体/冻干粉均可提供,可满足新冠/HCV/HBV等检测需求。


校准曲线

配制不同浓度的L-酪氨酸标准溶液,直接用紫外分光光度计于275nm测定其吸光度(A),以吸光度A为纵坐标,酪氨酸的浓度为横坐标,绘制校准曲线。根据校准曲线,计算出比酶活≥30 U/mg。


图1.以L-酪氨酸为标准品测定校准曲线


纯度

通过SDS-PAGE电泳来检测蛋白浓度,本公司自产的蛋白酶K的纯度在95%以上,大小在28.9kDa。

图2.蛋白酶K的SDS-PAGE电泳图


稳定性

将蛋白酶K粉末置于4℃存储一年,每隔1个月测酶活性,结果如下图,表明蛋白酶K稳定性好,酶活维持在95%以上。


图3.蛋白酶K在4℃下的稳定性检测