技术平台

大肠杆菌表达技术平台

大肠杆菌(E.coli )表达系统是较早被采用,也是目前掌握的较为熟悉的蛋白表达系统。大肠杆菌作为用于重组蛋白生产的宿主菌,它不仅具有遗传背景清楚、培养操作简单、转化和转导效率高、生长繁殖快、成本低廉,可以快速大规格地生产目的蛋白等优点,而且其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统。因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统之一。

1. 提供重组蛋白在大肠杆菌中可溶性性表达整套解决方案,重组蛋白在大肠杆菌中大量表达时,很容易在胞内形成不可溶的包涵体,为后期的纯化、复性带来麻烦,而且复性所得到的蛋白活性很低甚至没有活性。本公司通过选择合适的宿主细胞、分子伴侣共表达或融合标签表达,提高重组蛋白在细胞质中表达的产量和可溶性,或者选择分泌表达的方式制备高活性的重组蛋白,具备整套解决方案。

2. 大肠杆菌表达系统应用广泛,已成功表达分子酶、生化酶、细胞因子、抗原、抗体、毒性蛋白或小分子多肽等,在原核表达系统中积累了丰富的经验。

哺乳动物细胞表达技术平台

哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供较接近于天然状态完整的翻译后修饰(例如糖基化、磷酸化等),在蛋白表达过程中会形成接近天然蛋白的蛋白质折叠和聚合,具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰。由哺乳动物细胞翻译后再加工修饰产生的外源蛋白质,在活性方面高于其他表达系统,更接近于天然蛋白质。华美科赛格建立了成熟的哺乳动物蛋白表达系统及纯化服务平台,提供哺乳动物蛋白表达系统的表达与纯化服务。

1. 表达载体可在哺乳动物细胞中高产量,高活性表达。

2. 多种表达系统可供选择:瞬时表达、稳定细胞株表达、无血清悬浮表达、大规模悬浮细胞表达等。

3. 瞬时表达系统以HEK293细胞和CHO细胞为表达宿主,易转染,转染效率高,可提供灵活的服务以满足不同的客户的需求。

4. 稳转表达系统主要以CHO细胞为表达宿主,能够在悬浮培养中具有相对较快的生长速度和较高的蛋白质表达产量,是主要的生产细胞系。

5. 根据客户的不同需求,使用高标准的生物反应器可以提供10L/20L/50L等的培养规模。

6. 拥有先进的AKTA purifier系统和离子柱及亲和层析柱等。

杂交瘤抗体技术平台

小鼠杂交瘤抗体技术是通过物理、化学或生物的方法将小鼠骨髓瘤细胞与免疫后的小鼠B淋巴细胞进行融合,形成具备双亲特性的能分泌针对免疫原单一表位的均质的高特异性抗体的杂交瘤细胞,融合细胞既具有肿瘤细胞无限繁殖的特性,又具有淋巴细胞能分泌特异性抗体或因子的能力。华美科赛格建立了成熟的杂交瘤融合筛选、评价、生产、纯化技术平台,为客户提供优质的诊断抗体原料。

1. 发展多年,技术操作流程透明,颇受认可。

2. 杂交瘤细胞上清或抗体通过间接竞争法可直接针对特定表位进行筛选,筛选到的单抗特意性强。

3. 我们的杂交瘤细胞全部都能适应无血清培养基环境,易于生产放大和批间管控。

4. 根据客户不同的需求,使用WAVE生物反应器可以轻松满足客户10g级别以上供货需求。

5. 拥有先进的AKTA Pure150M层析系统,以及不同规模大小的离子、亲和、分子筛层析柱。

单B抗体技术平台

单B抗体平台是一种制备周期短、无需细胞融合、无需基因合成就可得到重、轻链天然配对的单克隆抗体的新兴抗体技术。简单来说,单B抗体平台包含以下几个步骤:

1. 从外周血或免疫器官中初步提取免疫细胞、分离外周血单个核细胞(PBMC);

2. 使用特异细胞分离技术、磁性活化细胞分选(MACS)或荧光活化细胞分选(FACS)等技术鉴定和分离出特定的B细胞;

3. 将分离出的B细胞进行单细胞培养,检测培养基上清中的抗体含量,标记能分泌特异抗体的阳性细胞;

4. 提取和扩增阳性细胞的抗体基因;

5. 将抗体基因克隆到表达载体中,并在真核系统中表达;

6. 纯化表达产生的抗体,并用发光平台对抗体进行评估。

1. 利用单B细胞技术平台可以获得兔单克隆抗体。兔单抗相比鼠单抗亲和力更高、表位更丰富。

2. 制备周期短。单B细胞筛选和培养仅需15天,大大缩短细胞培养时间。

3. 重轻链天然配对,无需在体外配对、淘选,更易获得高亲和力抗体。

4. 将抗体基因重组表达,可以更稳定保存抗体信息,避免批间差异。

5. 特异细胞分离技术已申请发明专利,可以将单B细胞筛选阳性率提高一倍以上。

胶乳颗粒增强比浊分析(LETIA)

原理:当样本中的待测抗原与试剂中的抗体相遇后,即可发生特异性的结合反应,从而形成网状的抗原-抗体分子复合物,引起溶液中浊度的变化,通过测试溶液中吸光度的变化,从而确定样本中待测抗原的浓度。

优势:胶乳增强免疫比浊分析法自2009年以来经过十多年的技术积累,目前是华美科赛格的核心验证技术之一。其基于抗原抗体特异性反应以及胶乳增强放大的原理,具有灵敏度高,特异性好,抗干扰能力强等优点。

酶联免疫吸附检测分析(ELISA)

原理:酶联免疫吸附检测技术以微孔板为固相载体,HRP标记的抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生特异性反应形成复合物,通过TMB显色的定量或定性分析技术。

优势:酶联免疫吸附检测分析是建立在抗原-抗体反应和酶的高效催化作用的基础上,因此具有高度的灵敏性和特异性。该技术是华美生物最具有优势的技术平台,从2007年开始一直持续积累至今并发挥着重要作用,其应用从科研检测产品到诊断试剂原料的筛选鉴定,目前是华美科赛格诊断原料免疫分析最基础的检测技术平台。

化学发光免疫分析(CLIA)

原理:示踪物(酶、发光基团)标记抗体在特定底物作用下,发生化学反应并发射出光子,该光子计数的变化与样本中的待测物质存在对应关系,从而确定样本中待测物质的浓度。

优势:管式微粒子化学发光分析采用悬浮的磁微粒作为载体,具有较高比表面积、更高的灵敏度、更宽的线性范围、更快的检测速度和更好的重复性、易于自动化操作。华美科赛格该平台从2014年开始应用于诊断试剂原料的开发和应用评估,从板式酶促发光过渡到以微粒子酶促发光及直接发光为主,是诊断应用的主要平台之一。

免疫层析技术(TRF-LFIA)

原理:样品中待测抗原与带有特异性抗体的胶体金或荧光微球发生结合,再与硝酸纤维素上固定的特异性抗体形成双抗体夹心复合物,通过胶体金或荧光微球的信号检测实现特异性的免疫分析。

优势:胶体金免疫层析技术操作简单、检测快速、便携性强,在即时即地检测领域发挥着重要作用,荧光定量免疫层析技术除了上述优点外,还实现了检测结果的定量,实现快速、超敏、准确的微量检测。华美科赛格从2015年开始,基于早期POCT诊断应用及小分子快检的平台技术积累,由此提升并完善的胶体金免疫层析技术平台和时间分辨荧光免疫层析技术平台是华美科赛格快速诊断原料评价重点发展的分析技术。

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